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細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的污染以及解決方案

提 供 商: 上海美軒生物科技有限公司 資料大小:
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詳細(xì)介紹
  
  
  細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的污染情況總結(jié)如下
  
  常見(jiàn)的污染如下:
  
  1、細(xì)菌:細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀,根據(jù)感染細(xì)菌的不同,可有不同的外形,培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁變黃,對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)影響明顯。
  
  仔細(xì)檢查一下器皿的滅菌情況,是否在高壓滅菌時(shí)放氣時(shí)間足夠,壓力足夠!尤其是和儲(chǔ)存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品,連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲(chǔ)存液污染,一定要注意!下次使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現(xiàn)象!
  
  可在培養(yǎng)液中加相應(yīng)的抗生素處理
  
  2、霉菌:培養(yǎng)液是清亮的,倒置顯微鏡下無(wú)雜質(zhì),37度孵箱培養(yǎng)2-3天,仍清亮,但出現(xiàn)絮狀雜質(zhì),鏡下可見(jiàn)呈細(xì)絲狀的團(tuán)狀漂浮物,可看到明顯的菌絲,細(xì)胞仍可生長(zhǎng),但時(shí)間長(zhǎng)之后,細(xì)胞的活力狀態(tài)變差,
  
  用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內(nèi),再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅?;蛘咴谂囵B(yǎng)箱的托盤加入飽和的消毒磷酸氫二鈉高鹽液體,可以防止霉菌污染。
  
  CO2孵箱被霉菌污染后,可把所有細(xì)胞暫時(shí)轉(zhuǎn)移,采用過(guò)氧乙酸擦洗孵箱(包括隔板,箱壁)。并把過(guò)氧乙酸放置在孵箱內(nèi)一個(gè)小時(shí),使其蒸汽彌漫。待過(guò)氧乙酸的氣味消散后,再移入細(xì)胞。孵箱應(yīng)定期清潔(2月左右),尤其在多雨的季節(jié)。
  
  其它培養(yǎng)箱清洗方法是:用84液擦洗-清水擦洗-75%酒精擦洗-紫外燈照。
  
  預(yù)防霉菌污染,可在培養(yǎng)基里加3u/ml的兩性霉素或制霉菌素或放線菌素D或雙抗;但細(xì)胞一旦污染,很難挽救,制霉菌素或放線菌素D或雙抗都于事無(wú)補(bǔ),建議舍棄該污染細(xì)胞。,將環(huán)境*消毒,如果所有細(xì)胞都污染,可能是系統(tǒng)污染,檢查一下培養(yǎng)基和器材,如果只是個(gè)別污染,可能是操作問(wèn)題,就要注意操作
  
  3、支原體:黑色的,好象多為多形,培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁,原體感染,國(guó)內(nèi)血清很多都沒(méi)有做支原體陰性檢測(cè),而支原體是牛血清中zui常見(jiàn)的微生物之一。而且它不能用過(guò)濾的辦法除去。支原體感染細(xì)胞以后,細(xì)胞病變不很明顯,只是慢慢死去。
  
  用泰樂(lè)菌素,獸用支原體病的藥,但可用于細(xì)胞培養(yǎng),無(wú)任何不良反應(yīng)。Sigma公司的使用時(shí)用50ug/mlTylosin培養(yǎng)液培養(yǎng)6天或連續(xù)傳兩代即可清除支原體污染。如果作為常用的抗生素的話,建議用8ug/ml的濃度。
  
  4、黑蛟蟲:可以穿透濾膜,也可以通過(guò)空氣傳播,低倍下為黑色點(diǎn)狀,高倍下可看見(jiàn)黑色的小蟲游來(lái)游去,培養(yǎng)液也是不渾的,一般不會(huì)太影響,細(xì)胞還是可以用的。常常是細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好,且觀測(cè)到的運(yùn)動(dòng)物無(wú)明顯增多,且培養(yǎng)液顏色、透明度無(wú)明顯變化,可在同一批號(hào)的血清養(yǎng)的細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象。對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)不會(huì)有明顯影響,在細(xì)胞增殖旺盛之后會(huì)自然消失,除更換血清外無(wú)須特殊處理。建議如果細(xì)胞有可能是此種污染的話,可以增加細(xì)胞的種板密度,以提高細(xì)胞的生存率。
  
  5、真菌:一般培養(yǎng)液清亮,不變色,鏡下有絲狀物,有些真菌開(kāi)始很像死細(xì)胞碎片,只是它很多很多的小塊很清楚,象珊瑚狀,不象細(xì)胞碎片分不清,慢慢的會(huì)長(zhǎng)出很細(xì)的黑色絲狀物。真菌生長(zhǎng)的比較慢,不象細(xì)菌那么容易被發(fā)現(xiàn),但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細(xì)胞就被污染了,也很難救活了。
  
  6、原蟲:培養(yǎng)液可輕微渾濁,顯微鏡下那些細(xì)小的點(diǎn)狀物數(shù)量非常多,輕微活動(dòng),細(xì)胞雖然可以生長(zhǎng)但繁殖速度卻明顯減慢,而且細(xì)胞狀態(tài)不好,邊緣不清楚,細(xì)胞不透亮。他們與細(xì)胞可共生但會(huì)與細(xì)胞爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng)。這種共生是非常普遍的,但他們的數(shù)量小,細(xì)胞站優(yōu)勢(shì)所以不會(huì)影響到細(xì)胞的正常生長(zhǎng),只有當(dāng)他們到達(dá)一定的數(shù)量時(shí)就會(huì)影響到細(xì)胞的生長(zhǎng),zui終形成惡性循環(huán)。
  
  污染的可能原因:可能原因很多比如配液消毒問(wèn)題、操作問(wèn)題、環(huán)境問(wèn)題等等
  
  關(guān)于培養(yǎng)基的無(wú)菌狀況,取培養(yǎng)基至培養(yǎng)瓶中(不加細(xì)胞),37度試培養(yǎng)一段時(shí)間后觀察。如果沒(méi)有細(xì)菌生長(zhǎng)就是操作的問(wèn)題。
  
  也可以在培養(yǎng)基中事先加入雙抗(硫酸鏈霉素和氨芐青霉素)。但雙抗有時(shí)會(huì)影響細(xì)胞的狀態(tài),所以在做轉(zhuǎn)染、檢測(cè)細(xì)胞某項(xiàng)指標(biāo)前一定要撤去雙抗,以避免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
  
  1、孵箱應(yīng)定期用三氧機(jī)消毒或者紫外光照射,并用酒精和新潔爾滅試擦孵箱同時(shí)孵箱內(nèi)的水應(yīng)是三蒸水
  
  2、超凈臺(tái)\取材\器材\培養(yǎng)液\培養(yǎng)瓶\操作等因素
  
  3、超凈臺(tái)的風(fēng)機(jī)不能過(guò)大,風(fēng)機(jī)到6-8格。否則也可能能致霉菌污染
  
  4、無(wú)菌室經(jīng)甲醛熏蒸消毒后,可用同等量的氨水噴灑中和,約幾小時(shí)即可進(jìn)入操作。